Начав работу над картиной, и не окончив ее, Леонардо возвратился к ней к концу жизни. Согласно Гиоргио Вазари, после возвращения в родной город, он получил заказ на живопись алтаря для церкви Сантиссима Аннунциата во Флоренции.
Работая в монастыре, при церкви, он сначала выполнил предаврительный рисунок. Есть документы, что рисунок демонстрировался в течение двух дней и вызвал восхищение. Перед нами сцена, полная движения: Мария — на коленях у своей матери, Св. Анны. Годовалый ребенок вырывается из рук матери. Он отвернулся от нее, играя с ягненком.
Почти встав с колен Св. Анны, Мария пытается оттянуть ребенка. Возможно, Анна представляет Церковь, которая не хочет, чтобы что-нибудь стояло на пути Страсти Христа. Есть некоторые элементы сходные с «Картоном Берлингтонского дома». Особенно удивляет, что в лицах Марии и ее матери не чувствуется большой разницы в возрасте, как на картинах других художников.
Кроме того, кажется, что фигуры женщин сливаются в одну, даже младенец — часть ее. Все это подчеркивает близкое родство между Анной, Марией и Христом, но расположение каждого — указывает на его роль в этой семье. Помимо богатства движений, живопись поразительна громадным пейзажем, занимающим треть картины, этим характерны работы Леонардо да Винчи. Высокие горы и долины, даже низины, возвышаются над группой. Природа-она главная! Пейзаж можно также толковать, как символику: бесплодная, выжженная солнцем земля, яркий свет, могут читаться, как символ Марии, просящей за ребенка.